液相色譜法檢測苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的疑難詳解
點擊: 次 時間:2017-04-11 09:56
苯甲酸、山梨酸、糖精鈉是衡量食品衛生質量的重要指標，苯甲酸、山梨酸的檢測參照GB/T5009.29-2003，糖精鈉的檢測參照GB/T5009.28-2003，即可開展實驗。
苯甲酸、山梨酸、糖精鈉雖是較常見的檢測項目，但是要得到一個準確可靠的結果，也存在一定的難度，許多新手常出現因對方法理解發生偏差而檢測出錯的事故。筆者根據自己多年該方面工作的實際經驗出發，以苯甲酸、山梨酸為著重點，從樣品前處理、檢測儀器的選擇、超標時的判斷等幾個易出問題的方面，進行了詳細的闡述。
2樣品前處理的注意事項
GB/T5009.28-2003和GB/T5009.29-2003在文字結構上有缺陷，在涉及用儀器法測定苯甲酸、山梨酸、糖精鈉時，只講述了液體樣品的前處理方法，沒有涉及對固體樣品的前處理。
食品樣品往往含有大量的油脂、蛋白質，對提取極為不利;如處理不干凈也會污染色譜柱，影響檢測工作。這類樣品處理的關鍵在于如何找到一種較理想的沉淀劑，盡量排除待測樣品中的油脂、蛋白質，且不影響待測物組分的回收率。
GB/T5009.29-2003使用5%硫酸銅溶液沉淀蛋白，對于蛋白質含量較低的食品尚可，對于豆粉、奶粉、月餅等高油脂、高蛋白樣品則沉淀效果不理想。如用10%鎢酸鈉溶液作為沉淀劑，效果好些;如用10%亞鐵氰化鉀溶液和20%醋酸鋅溶液則效果更理想(這是筆者目前用過最理想的沉淀劑)。
具體操作步驟如下：
取一定量樣品，搗碎，利用四分法原理稱取樣品5.0克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振蕩均勻，加入氫氧化鈉溶液(1mol/L)1.0ml，加入9.5mL10%亞鐵氰化鉀溶液，9.50mL20%乙酸鋅溶液，定容，振蕩使其充分混勻后,用濾紙初濾除去沉淀物,初濾液過0.45μm微孔濾膜,收集濾液于樣品瓶中，樣品處理液和標準有溶液各進樣5uL測定。
用這種方法簡單易行，接觸有機試劑少，重復性和回收率都令人滿意;缺點是一定要用液相色譜法檢測，有一定局限。
3檢測儀器的選擇
雖然液相色譜儀操作起來比氣相色譜儀要復雜，但筆者建議如條件許可仍盡量用液相色譜法檢測。原因如下：
3.1液相色譜法所用的樣品處理方法遠比氣相色譜法簡單，且不需使用有機試劑。尤其對于高油脂樣品(如月餅)若采用堿化-排油-酸化-提取-揮干-溶解等步驟，再上氣相色譜儀檢測，工作量大，試劑毒性也大，且結果由于處理步驟太多而難以保證準確。
3.2用液相色譜法還可同時完成糖精鈉項目的檢測，而氣相色譜法只能做苯甲酸、山梨酸的檢測。
3.3液相色譜儀所用的紫外檢測器比氣相色譜儀的氫火焰檢測器靈敏，可進行更低含量的檢測。如用二極管陣列檢測器，還可輔助定性，這更是氣相色譜氫火焰檢測器不可比擬的。
4選用氣相色譜儀時的注意事項
GB/T5009.29所用的氣相色譜柱為5%DEGS+1%磷酸固定液的60-80目ChromosorbWAW，。這種柱有性能穩定、重復性好、保留時間穩定的優點，但同時也有穩定時間較長的缺點。
該柱的適用的樣品提取溶劑為石油醚或乙醚，如果用甲醇或乙醇，則溶劑峰拖尾效應較大，對山梨酸的測定有影響。
如用毛細管柱，能取得更好的峰形和靈敏度，但其穩定性及特異性不如填充柱。一般可用非極性毛細管柱，0.530mm內徑，10-15m長度。色譜條件可能需用程序升溫。
在氣相色譜儀上的出峰次序為先出山梨酸，后出苯甲酸。
糖精鈉不能直接用氣相色譜進行檢測，必須衍生化后才能汽化進樣。
上一篇：氣相色譜儀器系統中檢測器操作要點 下一篇：氣相色譜儀器系統中檢測器操作要點
苯甲酸、山梨酸、糖精鈉雖是較常見的檢測項目，但是要得到一個準確可靠的結果，也存在一定的難度，許多新手常出現因對方法理解發生偏差而檢測出錯的事故。筆者根據自己多年該方面工作的實際經驗出發，以苯甲酸、山梨酸為著重點，從樣品前處理、檢測儀器的選擇、超標時的判斷等幾個易出問題的方面，進行了詳細的闡述。
2樣品前處理的注意事項
GB/T5009.28-2003和GB/T5009.29-2003在文字結構上有缺陷，在涉及用儀器法測定苯甲酸、山梨酸、糖精鈉時，只講述了液體樣品的前處理方法，沒有涉及對固體樣品的前處理。
食品樣品往往含有大量的油脂、蛋白質，對提取極為不利;如處理不干凈也會污染色譜柱，影響檢測工作。這類樣品處理的關鍵在于如何找到一種較理想的沉淀劑，盡量排除待測樣品中的油脂、蛋白質，且不影響待測物組分的回收率。
GB/T5009.29-2003使用5%硫酸銅溶液沉淀蛋白，對于蛋白質含量較低的食品尚可，對于豆粉、奶粉、月餅等高油脂、高蛋白樣品則沉淀效果不理想。如用10%鎢酸鈉溶液作為沉淀劑，效果好些;如用10%亞鐵氰化鉀溶液和20%醋酸鋅溶液則效果更理想(這是筆者目前用過最理想的沉淀劑)。
具體操作步驟如下：
取一定量樣品，搗碎，利用四分法原理稱取樣品5.0克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振蕩均勻，加入氫氧化鈉溶液(1mol/L)1.0ml，加入9.5mL10%亞鐵氰化鉀溶液，9.50mL20%乙酸鋅溶液，定容，振蕩使其充分混勻后,用濾紙初濾除去沉淀物,初濾液過0.45μm微孔濾膜,收集濾液于樣品瓶中，樣品處理液和標準有溶液各進樣5uL測定。
用這種方法簡單易行，接觸有機試劑少，重復性和回收率都令人滿意;缺點是一定要用液相色譜法檢測，有一定局限。
3檢測儀器的選擇
雖然液相色譜儀操作起來比氣相色譜儀要復雜，但筆者建議如條件許可仍盡量用液相色譜法檢測。原因如下：
3.1液相色譜法所用的樣品處理方法遠比氣相色譜法簡單，且不需使用有機試劑。尤其對于高油脂樣品(如月餅)若采用堿化-排油-酸化-提取-揮干-溶解等步驟，再上氣相色譜儀檢測，工作量大，試劑毒性也大，且結果由于處理步驟太多而難以保證準確。
3.2用液相色譜法還可同時完成糖精鈉項目的檢測，而氣相色譜法只能做苯甲酸、山梨酸的檢測。
3.3液相色譜儀所用的紫外檢測器比氣相色譜儀的氫火焰檢測器靈敏，可進行更低含量的檢測。如用二極管陣列檢測器，還可輔助定性，這更是氣相色譜氫火焰檢測器不可比擬的。
4選用氣相色譜儀時的注意事項
GB/T5009.29所用的氣相色譜柱為5%DEGS+1%磷酸固定液的60-80目ChromosorbWAW，。這種柱有性能穩定、重復性好、保留時間穩定的優點，但同時也有穩定時間較長的缺點。
該柱的適用的樣品提取溶劑為石油醚或乙醚，如果用甲醇或乙醇，則溶劑峰拖尾效應較大，對山梨酸的測定有影響。
如用毛細管柱，能取得更好的峰形和靈敏度，但其穩定性及特異性不如填充柱。一般可用非極性毛細管柱，0.530mm內徑，10-15m長度。色譜條件可能需用程序升溫。
在氣相色譜儀上的出峰次序為先出山梨酸，后出苯甲酸。
糖精鈉不能直接用氣相色譜進行檢測，必須衍生化后才能汽化進樣。
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