液相色譜儀分析時如何選擇合適的色譜柱
點擊: 次 時間:2021-12-15 11:12
液相色譜柱有不同的長度、內(nèi)徑和類型等,我們在做色譜分析時應如何進行選擇呢?
1、色譜柱的長度和內(nèi)徑
對于色譜柱的長度和內(nèi)徑,可以基于我們需要分析物質(zhì)的復雜程度來選擇。兩支同樣填料的色譜柱,柱長越短,分離時間越快,分辨率會更好,同時壓力也將更大,可結(jié)合樣品的復雜性和希望分離的時間來選擇合適的柱長。對于色譜柱的內(nèi)徑,窄徑柱可提高柱的靈敏度,并可明顯降低溶劑的使用量。寬徑柱可以將系統(tǒng)死體積的影響降到最低,載樣量高,抗污染。
想用不同內(nèi)徑和長度的柱子來進行色譜方法轉(zhuǎn)移,該怎么調(diào)整色譜條件呢?對不同內(nèi)徑和長度的色譜柱,我們可以使用以下方法來轉(zhuǎn)換進樣量和流速:
2、苯基柱,氰基柱的適用情況
苯基柱可用于含苯環(huán)的芳香族化合物的測定,具有較高的選擇性。氰基柱/CN柱可作為一個保留能力最弱的反相柱使用,也可作為一個活性降低的正相柱使用。
3、要提高分離度時選擇色譜柱的方法
多個樣品不好分離的時候,該怎么通過選擇合適的柱子來提高分離度呢?提高分離度可從三個主要影響因素來考慮:柱效、選擇性和保留因子。可通過減小填料粒徑和增加柱長提高柱效。選擇性和固定相選擇以及pH條件有關(guān),通過選擇合適的色譜柱和合適的pH,可以提高選擇性。保留因子主要與流動相組成和比例有關(guān),其次流動相pH和離子強度影響目標物存在狀態(tài),也會影響保留因子。有時候適當延長出峰時間增加保留因子,也可提高分離度。
4、測定多肽選用的色譜柱
分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18或C8柱就能測定,也有用離子交換柱、水性柱和HILIC親水作用柱。若流動相中含有三氯乙酸這類酸性添加劑,建議還是使用耐受低pH的色譜柱。
5、根據(jù)樣品特點進行選擇
(1)樣品是極性的且弱酸性的,,可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測,即要選擇(2)如果樣品極性太強或酸性太強,可以選擇CN,NH2,硅膠柱,HILIC(親水色譜),也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。
(3)若樣品是堿性的,可選擇高純硅膠柱或一些經(jīng)過修飾的C18柱(如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等),他們都會減少堿性化合物的拖尾,一般會選擇中性或偏堿的條件下做,因為這樣可增加堿性樣品的保留。
(4)如果堿性化合物的極性太強或堿性太強,可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測,或者選用HILIC色譜柱、強離子交換柱和C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。
上一篇:關(guān)于山東濰坊壽光職業(yè)教育中心學校采購分光光度計、電子分析天平 下一篇:關(guān)于山東濰坊壽光職業(yè)教育中心學校采購分光光度計、電子分析天平