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常見三種色譜法的特點(diǎn)及應(yīng)用

點(diǎn)擊: 次 時(shí)間:2022-05-17 16:03

常見三種色譜法的特點(diǎn)及應(yīng)用(圖1)

    色譜作為一種分離技術(shù)與方法,自20世紀(jì)40年代以后,逐漸得到發(fā)展,而且其勢(shì)頭越來(lái)越猛,從技術(shù)到理論,再到各種分離模式,以及在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥物臨床、化學(xué)化工、食品安全、環(huán)境監(jiān)測(cè)、商品檢驗(yàn)、法醫(yī)檢驗(yàn)等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用,現(xiàn)已成為分析化學(xué)學(xué)科中的一個(gè)重要分支,對(duì)科學(xué)的進(jìn)步和生產(chǎn)的發(fā)展起著重要的作用。各種色譜儀器已成為各類研究室、實(shí)驗(yàn)室極為重要的儀器設(shè)備。

   經(jīng)常會(huì)用到的色譜法主要有五種:柱色譜法、薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法和超臨界流體色譜法。本文主要介紹前三種。

一、柱色譜法

    是最原始的色譜方法。

    該方法將固定相注入下端塞有棉花或?yàn)V紙的玻璃管中,將被樣品飽和的固定相粉末攤鋪在玻璃管頂端,以流動(dòng)相洗脫。

    常見的洗脫方式有兩種:一種是自上而下依靠溶劑本身的重力洗脫,另一種:自下而上依靠毛細(xì)作用洗脫。

    收集分離后的純凈組分也有兩種不同的方法:一種方法是在柱尾直接接受流出的溶液,另一種方法是烘干固定相后用機(jī)械方法分開各個(gè)色帶,以合適的溶劑浸泡固定相提取組分分子。

    柱色譜法被廣泛應(yīng)用于混合物的分離,包括:對(duì)有機(jī)合成產(chǎn)物、天然提取物以及生物大分子的分離。

二、薄層色譜法(TIC)

    是應(yīng)用非常廣泛的色譜方法。

    這種色譜方法將固定相涂布在金屬或玻璃薄板上形成薄層,用毛細(xì)管、鋼筆或者其他工具將樣品點(diǎn)于薄板一端,之后將點(diǎn)樣端浸入流動(dòng)相中,依靠毛細(xì)作用令流動(dòng)相溶劑沿薄板上行展開樣品。

    薄層色譜法成本低廉、操作簡(jiǎn)單,被用于對(duì)樣品的粗測(cè)、對(duì)有機(jī)合成反應(yīng)進(jìn)程的檢測(cè)等用途。

三、高效液相色譜法(HPLC)

    是目前應(yīng)用最多的色譜分析方法。

    高效液相色譜系統(tǒng)由流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器和記錄器組成,其整體組成類似于氣相色譜,但是,針對(duì)其流動(dòng)相為液體的特點(diǎn)作出很多調(diào)整。HPLC輸液泵要求輸液量穩(wěn)定平衡;進(jìn)樣系統(tǒng)要求進(jìn)樣便利、切換嚴(yán)密;由于液體流動(dòng)相黏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于氣體,為了減低柱壓,高效液相色譜的色譜柱一般比較粗,長(zhǎng)度也遠(yuǎn)小于氣相色譜柱。

    HPLC應(yīng)用非常廣泛,幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域。高效液相色譜法依據(jù)溶質(zhì)(樣品)在固定相和流動(dòng)相中分離過(guò)程的物理化學(xué)原理可以分為以下幾種:

①吸附色譜:用固定吸附劑做固定相,以不同極性溶劑做流動(dòng)相,依據(jù)樣品中各組分在吸附劑上吸附性能的差別來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。

②分配色譜

③親水作用色譜

④疏水作用色譜

⑤離子色譜

⑥體積排阻色譜

⑦親和色譜





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