一、質量控制相關定義

質量控制：滿足質量要求的操作技術和活動。

質量保證：為了滿足實驗室質量要求 ，制定相應的計劃，實施證明（記錄）所進行的一系列的系統活動

外部質量控制：通過互相校準和/或檢驗對實驗室的操作和結果所進行的控制

內部質量控制：實驗室內部采取的以對比分析、跟蹤以及相關方法，對實驗室工作的連續性控制計劃。

質量手冊：是描述質量系統元素的文件或文件的集合。

二、實驗室要求

 按國家實驗室認可的概念，是指一個能夠承擔法律責任的實體。這里所指的是實驗室（微檢室）內建立的質量管理的保證體系。人員、房屋設備滿足檢測工作需要。

1、人員要求

實驗室人員的分類：管理人員、技術人員、技術支持人員等。

相應崗位的人員，應具備相應的技術能力，相應的技術能力證明（證書及證件）。

微生物檢驗室因有相應技術能力的人負責室內的技術工作。并設立質量監督員。

2、房屋條件要求

房屋要求：具有適宜、足夠寬敞、通風有良好的照明。

房屋內墻面及地等應采用易于清潔的材料，保持房間清潔。

房間的設置，以其開展的工作內容加以分用，設立專用房間。

房間的大小還應根據從事實驗人員的進入數量上加以考慮。

3、環境設施要求

專用房間的溫濕度控制與記錄（樣品存放室）

特殊環境的微生物指標控制與記錄（無菌室等）

專用工作室的標準操作規程和定期的檢測校準程序。（潔凈室等）

特殊環境中的專用設施質量控制應符合有關要求（凈化工作臺）

三、設備控制和程序

1、微生物檢驗常用需監控的設備和儀器

培養箱（生化培養箱或CO2培養箱等）、干燥箱、高壓滅菌鍋、凈化工作臺、pH計、冰箱（低溫冰箱或冷柜）溫度計、紫外燈、顯微鏡、離心機?、電子天平。

小計量容器

微生物測定儀器、微生物檢定儀器、空氣采樣器、酶標儀專用等。

2、具體設備控制

（1）高壓滅菌鍋的溫度控制

高壓滅菌鍋；生物指示菌法（常用）、化學變色紙片及高壓滅菌鍋溫度計等方法進行檢測。

生物指示菌法是一種高壓滅菌鍋的效果顯示法。

高壓滅菌鍋由專人按作業指導書操作，并做好每一次的作業記錄。

高壓滅菌鍋使用時，內置物品不能太多，單位體積內的內容物（每瓶內的培養基）不能太多。同時應注意內容物不同耐受溫度?？偟谋┞稌r間最好不要超過45min。

高壓滅菌鍋日常工作記錄應包含以下信息：高壓滅菌的材料、開始時間、壓力/溫度、取出時間、高壓滅菌膠帶的顏色變化（日常常用無菌培養代替）

高壓滅菌鍋溫度波動范圍：110，115和121±2℃。

高壓滅菌鍋校準周期一般在半年。

（2）干燥滅菌箱溫度控制

干燥滅菌箱日常工作記錄中應包括以下信息：開始的時間、到達滅菌溫度時的時間、取出的時間（或關閉時間）。

干燥滅菌箱的溫度校準；用參考溫度計進行溫度測試。

干燥滅菌箱溫度要求與精確度：160±5 ℃或180 ±5 ℃。前者為滅菌2h，后者為30min。

干燥滅菌箱校準時間一般為一年。

（3）培養基配制用蒸餾水的控制

對于蒸餾水器來說：按設備說明，定期清潔離子交換器和更換離子交換材料。

檢測要求：西歐標準為微生物檢驗用蒸餾水的特定電導率＜0.5ms/m；細菌數＜50cfu/ml。我們日常用的標準為＜10ms/m，未見有細菌指標。

檢測頻率：1次/每月。

蒸餾水定點供應，并做好相應的質量控制，記錄檢測結果。

（4）天平的管理

天平放置要求：無振動、無氣流影響及水平臺面上。

天平要有使用及運行檢查記錄。

天平作為計量儀器是列入國家強制檢定的范圍，一般1次/年進行檢定。

運行檢查頻率按運行計劃或按產品（天平生產廠家）給出的標準重量單位進行對照

（5）pH計

pH計使用前應用標準液進行校準。

緩沖液使用有效期：PH4.00 約1年

PH7.00 約6個月

pH9.00 約6個月

pH計的維護：電極外表的定期清洗；電極敏感性檢測及極性恢復。

（6）凈化工作臺的控制

水平流凈化工作臺工作區域，要求潔凈度為100級?？諝獬两?0min，細菌數＜1個/皿。垂直流凈化工作臺，細菌數＜0.49個/皿.

凈化工作臺運行檢查頻次：1次/月主要是細菌沉降檢測。

凈化工作臺高效過濾膜一般為一年更換一次，并同時進行粒子與細菌沉降檢測。

（7）紫外線燈的控制

檢測方法：儀器測試法和生物測試法。前者是通過專用儀器檢測紫外燈管發射的紫外光強度。國家消毒技術規范中表明在距離照射無1米處，要求其強度為90。

生物測試法：采用一定的菌培養物，經一定比例稀釋，菌量控制在200-250個/0.5ml，涂布平板在紫外燈光下照射，2min，同時設置普通光源的對照組，后置37℃48h，計算其殺滅率。要求殺滅率達99%。

（8）顯微鏡的控制

顯微鏡應制定作業指導書，日常維護記錄及自校記錄。

顯微鏡應置于無振動，避免灰塵，防潮等要求的環境。

（9）其它微生物檢測專用儀器的控制

細菌鑒定儀、酶標儀等設備，工作中常用陽性對照檢測其功能正常性。

儀器的檢定則按有關的部門檢定或按自校作業指導書進行。

儀器的使用登記、校準計劃、校準記錄等文件存檔。

儀器專人使用、操作者應取得相應的崗位培訓合格，持證上崗。

四、培養基質量控制

正確進行培養基質量控制，并作為一項經常性的工作，建立完整的檢驗資料，是實驗室今后通過相應級別的認證，在整個檢驗質量控制體系中所必須具備的文件資料。

現有的依據：衛生部1993年發布的食品檢驗用干燥培養基生產質量控制。但這個標準不完善。

1、常用培養基的質量控制

檢驗項目與方法：對新批號的干燥培養基物理、化學及生物學指標鑒定

A：感官（外觀）研細程度和顏色（溶解前后），透明度，雜質等；

B：PH測定，按各種培養基要求的PH±0.2，蒸餾水的PH應在6.4-7.0之間。

C：生物學指標檢定，被檢培養基相應細菌生長率測試；菌落大小及特征的檢測。

生長率測試：適用與液體和固體培養基：將菌培養液，用生理鹽水做倍比稀釋，取合適稀釋度進行平板計數或接種被檢的培養基試管，同時以按相關的培養基國標配方新鮮配制的培養基進行對照。不低與10%。

菌落大小測試：劃線分離測試菌，取10個菌落測量直徑大小，其直徑均值與新鮮配制的培養基無統計學差異。

2、常用培養基質量標準

外觀和理化標準：

干粉顏色：淡黃色粉末或呈現本培養基特有的顏色

溶解后培養基色澤：清晰透明（含瓊脂除外）淡黃色或特有的色澤；

滅菌后的培養基PH：7.2±2℃為多；個別弧菌檢驗用培養基pH值偏高為：8.0 ±2℃

生物學指標：菌落特征及菌落大小 。

3、培養基保存環境

制成的培養基保存環境為4℃冰箱，如制成平板則用塑料袋包裝置冰箱保存，干燥培養基干粉含有活性物質、遇熱易分解的物質應仔細查看存放條件，多數也須放在2-8 ℃條件保存。

有的培養基則以存放于10-15 ℃條件為易。如含有高濃度膽鹽的培養基。

4、培養基制備控制程序

培養基配制所用的儀器設備培養基配制所用的儀器設備必須經過相應的鑒定。

配制培養基所用的用具及容器配制培養基所用的用具及容器必須是清潔或是滅菌的，一些特殊不易洗刷清潔的玻璃器皿，必要時可用重鉻酸鉀硫酸清潔浸泡后，取出置5%氫氧化鈉溶液浸泡數分鐘，再用3%鹽酸溶液進行中和，然后用清水沖洗，烘干后備用。

5、培養基配制原料，試劑質量控制

配制好的培養基（尤其是糖發酵管）不宜久放。，因為培養培養基吸收空氣中的二氧化碳，會使培養基變酸，從而影響細菌的生長。

培養基中的抑制劑及指示劑一定要精確稱量，抑制劑要注意合理配伍。

6、培養基主要原料的質量控制

配制培養基的主要原料有蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、膽鹽、無機鹽和瓊脂等，這些主要原料的有劣，直接影響到培養基的質量，由此也將影響檢驗質量。

指標有感官、理化、物理、生物學。

五、檢測質量保證

定期使用有證標準物質和次級標準物質（參考物質）進行內部質量控制。實驗室間的比對或能力驗證，利用相同或不同方法進行重復檢測，對留存的樣品進行在檢測。

微生物檢驗質控方法如下：

1、菌落計數精密度控制直接計數

選擇同一標本，要求檢驗人員進行菌落計數。

將大腸菌（25922）或經檢定標化的菌片，通過合適的梯度稀釋，選擇合適的稀釋度進行菌落計數實驗操作。36±1℃培養24h進行菌落計數。

菌落計數精密度控制重復計數法

2、重復計數要求

自身同一平皿重復計數誤差 小于7.7%

實驗人員之間同一平皿重復計數誤差 ±18 .2%

自身同一梯度平行加樣兩皿間相對誤 小于7.7%

實驗人員之間同一梯度計數誤差X±18 .2%范圍

不同梯度間菌落計數最終誤差 小于7.7%

3、菌種鑒定質控

菌種鑒定質控要求，對所給的微生物菌種，按有關的方法及指標進行生化、血清等方面的鑒定。

鑒定質量評價：鑒定程序是否正確；鑒定方法是否正確；具體操作技術是否熟練，結果報告是否正確。每一項設立分值為25分?？偡譃?00分。

4、內部質量控制的推薦頻率

菌落計數精密度控制： 1次/3月；

菌種鑒定控制： 1次/半年或1年

盲樣測定丟失的對照 1次/半年

六、實驗室安全防護

1、培訓與告之

實驗室管理人員及實驗人員必須了解相關工作有關的危險。對招收新職工、工作開始發生變化或使用新方法，啟用新的設備時，這點尤為重要。所有工作人員，包括清潔和服務人員都要知道。需要進行口頭和書面兩種方式的通知。有關儀器必須要有字跡清楚其安全使用的書面說明。

2、標志

在進行致病性微生物工作的房間人口處必須要有警示標志。

實驗室的房間必須以使與微生物有關的危險得以過免的方式裝置，以使微生物的傳播得到限制，房間還應便于清潔和消除污染．工作臺必須由光滑的、耐消毒劑的材料制成。難以清潔的角落、彎頭及管道應盡可能地避免污染。

3、防止空氣污染

加熱培養蒙或其它化學物質時，粉塵可擴做到空氣中．這可給工作人員帶來過敏反應或出現其它問題．因此，設計排風裝置很重要，以至包括天平附近的抽風點。通常稱量應按正確的安全規程進行。

4、有毒有害物防護

濃酸和堿及其它腐蝕性化學物質和毒性物質必須專門保存，盡可能鎖存，以使它們引起的損害減至最低．

對實驗室所用的所有化學物質，實驗室必須有記述其危險及操作中可能的限制的產品表．

在所需的范圍內工作人員必須使用人體防護裝置，防護服、手套籌．使用安全設施是實驗人員的職責污染了的防護員應盡快地更換，離開工作室時，必須脫去。

5、消除污染和廢物的處理

實驗室必須要有關于應如何消除濺出的微生物污染的書面說明。另外，對廢物的處理，如用過的培養皿和打碎的玻璃器皿，應有固定的程序。所有被洗的物品在洗刷前均經高壓滅菌，洗滌工受微生物感染的危險就可以盡可能避免。

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