一、高效液相色譜介紹

高效液相色譜（HPLC）是色譜法的一個重要分支，它以液體為流動相，采用高壓泵將流動相（不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等）泵入裝有固定相的色譜柱中，被分析樣品在流動相與固定相之間通過不同的作用力以及作用力大小的細微差別，實現樣品移動速度的細微差別，最終完成被分析樣品的快速分離。

該方法已成為化學、醫藥、食品、工業、農業、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術，具有非常廣泛的應用。

二、高效液相色譜常見故障分析與解決

高效液相色譜法是通過高效液相色譜儀來完成的，儀器的性能對實驗結果有著重要的影響，保持儀器的穩定是保證每次實驗結果具有重復性的保證。但是由于高效液相色譜儀設計復雜，在使用過程中難免會出現一些問題，影響實驗。本文針對高效液相色譜儀日常中可能出現的一些故障做了分析與總結，并給出相應的參考意見與合適的解決方案。

1、易故障部件工作原理

高效液相色譜儀主要由溶劑系統、泵、進樣器、色譜柱、檢測器與數據處理系統組成（如下圖1.1），儀器通過往復泵將溶劑（流動相）泵入整個儀器的管路，經過進樣器時將被分析樣品帶入流動相中，然后快速進入色譜柱，經過色譜柱的分離后，各組分先后到達檢測器，檢測器采集的數據經計算機處理后得到我們最終看到的色譜圖。

為了降低樣品的擴散，提高柱效，一般儀器廠商都會將整個儀器的管路設計得比較細，但是太細的管過又容易出現堵塞，因此保證整個溶劑系統干凈，沒有固體雜質至關重要的，為此儀器生產商為儀器設計了幾個過濾裝置來保證溶劑中沒有固體雜質進入儀器的核心。如下圖1.2所示，其中的吸濾頭與在線過濾器均是為了過濾固體雜質。

與此同時，為了保證流動相能夠連續穩定、不間斷的泵入系統，儀器生產商將每個泵都設計成由兩個往復泵組成，一個泵抽溶劑時另一個泵剛好將溶劑均勻推入系統，但是整個過程要保證泵的密封性，不能讓溶劑滲出，因此延展性與機械性都很好的柱塞密封圈至關重要。往復泵的工作原理與注射器很像，它先從一個方向將溶劑抽到泵腔里，柱塞桿再將溶劑從另一個出口推出去，但是這兩個出口必須裝上單向閥（只允許液體按一個方向流動），防止溶劑回流。

2、吸濾頭

吸濾頭作為整個液相流路的第一道關卡，它能將流動相中的雜質很好的阻擋在外面，防止堵塞管路。

材料：不銹鋼或玻璃。

故障：堵塞。

表現：堵塞的吸濾頭導致溶劑無法正常輸入系統，管路內出現大量氣泡，造成系統壓力波動。

處理方法：將吸濾頭拔下來，玻璃材質的用30%HNO3水溶液浸泡過夜，再用純水與甲醇反復清洗，金屬濾頭則可以直接超聲清洗。

3、在線過濾器

在線過濾器是接在泵與進樣器之間的一個過濾裝置，主要作用是過濾泵中柱塞桿與密封圈反復摩擦產生的固體碎屑。

材料：不銹鋼或聚四氟乙烯。

故障：堵塞。

現象：系統壓力波動大或壓力偏高。

處理方法：超聲波清洗或更換濾芯，不銹鋼材質的可以用30%H3PO4水溶液超聲清洗20分鐘，純水反復超聲清洗至清洗后的水pH值呈中性，然后用甲醇超聲清洗10分鐘，聚四氟乙烯材質的建議直接更換。

4、單向閥

單向閥是一種溶劑只能沿進口流動，出口溶劑卻無法回流的裝置，它保證了流動相可以只沿一個方向均勻穩定的流動。

材料：機械寶石球或電磁閥。

故障：寶石球或塑料墊片受污導致密封不好或者電磁體內起密封作用的透明膜片會老化，產生微小的裂縫，泵工作時流動相在壓力作用下滲漏到電磁閥體內。

表現：系統壓力有規律的波動，且波動范圍大。

處理方法：寶石球單向閥先放在超純水中超聲10分鐘，再放在甲醇中超聲10分鐘或更換；電磁單向閥更換透明膜片或更換整個電磁閥體。

5、柱塞密封圈

材質：聚四氟乙烯。

故障：磨損，密封性變差，流動相滲入泵腔引起泵的故障。

表現：在線過濾器容易堵塞，更換周期變短。

處理方法：更換密封圈

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