一、液相色譜中流動相需具備的特點

   液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：

a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。

b、流動相與樣品不產生化學反應

c、流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

d、流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

e、流動相沸點不要太低，否則容易產生氣泡，導致實驗無法進行。

f、在流動相配制好后，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發生作用。

二、高效液相色譜儀流動相的配制

高效液相色譜法中的流動相主要用水性溶劑、有機溶劑或它們的混合液，但是如何配制。選擇配制的方法不同，分析結果特別是保留時間，是會有顯著差別的。具體如下：

高效液相色譜法中的流動相主要用水性溶劑、有機溶劑或它們的混合液，水性溶劑也常用于緩沖液。常因資料上表示的內容和實際的配制方法不同，而產生流動相的差異，影響了色譜圖和分析結果。一般來說，溶劑的混合按體積比（V/V）或重量比（W/W）進行。溶液的體積因溫度而變化，所以按重量比混合可調制再現性較好的混合溶劑，但由于操作較麻煩，通常多用體積比混合。只要沒有特別標明，就可按體積比進行混合，但在特殊情況下，如胺類粘度高的溶液混合時，有時用重量—體積比（W/V）的方法。

1、有機溶劑和水性溶劑的混合方法

有機溶劑和水性溶劑的混合液作為流動相是經常的，但由于混合方法不同，有時分析結果相差很大。如20mM磷酸鈉緩沖液（pH2.5）90%與乙腈10%的混合液，混合比為9∶1時，20mM 磷酸鈉緩沖液（pH2.5）90%與乙腈10%的體積比為9∶1，也就是可以解釋為各自按體積比例的相當量稱取后進行混合。另外，按10%乙腈解釋，用20mM 磷酸鈉緩沖液（pH2.5），將乙腈稀釋調制也可以成立。在后者情況下，產生混合體積減少部分，余下的添加20mM 磷酸鈉緩沖液。兩者雖然沒有太大的差別，但由于混合方式不同，分析結果，特別是保留時間，

也會有顯著的差別，這點必須注意。

2、50%或（V/V＝1/1）乙腈水溶液的配制方法

對于用V/V＝1/1的表示配制乙腈水溶液，多按這種方法進行：用量筒測定乙腈500mL，用另一量筒測定水500mL，兩種液體在瓶內充分搖晃混合。不過 50%乙腈水溶液的表示時，同樣也多是按上述方法配制，但查化學辭典時，實際上是按這種方法進行配制：首先將500mL乙腈，注入1L的量瓶中，量瓶邊攪拌邊加水，等待液溫達到室溫，用全量水，使溶液到1L。這樣一來，用%表示和“V/V”體積比表示，最終得出的流動相組成不同。也就是說，混合溶劑的密度，與由原溶劑密度計算的單純平均值不相同，所以用上述兩種方法調制的流動相組成差異。如在室溫（25℃）附近水50mL和乙腈50mL混合時體積不是100mL，而有所減少，約為96mL。在一般情況下，多用操作簡便的第一種方法。

3、溶劑體積的溫度影響

如前所述，溶液的密度受周圍溫度的影響。剛從溶劑冷藏箱拿出來的溶液溫度與實驗室的室溫相比，要低不少，乙腈和水混合液因發熱反應，溶液溫度升高。因此，為能調制再現性好的流動相，建議在使用前用恒溫水浴鍋將液溫調到接近室溫。

4、、用兩臺泵進行溶劑混合

在反相分析中，常用的有機溶劑和水的等濃度法，使用高壓兩元梯度系統，用兩臺泵將流動相分別輸液后混合等封閉式混合時與預先在瓶內混合后用1臺泵輸液時，因混合后體積變化的不同，保留時間也有所不同，一定要注意。不僅是流動性的調制方法，試樣溶液和其他溶液的調制也經常有上述問題，另外，在不同部門（醫藥部門或化工部門）各自都有自己的常識和習慣。在這種情況下，就要求各部門在制作相關溶液配制方法時能規定通則，定義設計溶液的調制方法，這樣避免混亂，以在日常工作中更好地記住這些表示方法。

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