在選擇液相色譜柱時通常會遇到一個問題：這根色譜柱能上多大的樣品量？雖然在做分析時會盡量避免色譜柱過載，但經(jīng)常會遇到一組分析物中同時包含了較高濃度的主成分（也就是藥物活性成分）和很低濃度的雜質(zhì)（包括工藝雜質(zhì)及降解雜質(zhì)），為了兼顧低濃度雜質(zhì)的靈敏度，必然要增大進樣體積或者提高進樣濃度以確保定量的準確性，因此某些時候就會造成色譜柱的過載。色譜柱的過載可以分為質(zhì)量過載和體積過載。

1、質(zhì)量過載

質(zhì)量過載又稱為濃度過載，是指在小體積進樣時（體積未過載），由于進樣濃度較高，靠近譜峰峰帶的固定相被飽和，也就是說進樣某一組分超過了色譜柱的載樣量而出現(xiàn)過載的現(xiàn)象。一般表現(xiàn)為色譜峰峰形拖尾，柱效較低。那么一般載樣量是多少呢？通常對于內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，其載樣量<50μg。如果是做方法轉(zhuǎn)移到其他色譜柱上，則需要調(diào)整進樣量，防止出現(xiàn)過載。

載樣量主要與色譜柱固定相和待分析物的性質(zhì)有關，首先固定相類型不一樣，品牌不一樣會造成載樣量較大的差異。其次待分析物質(zhì)性質(zhì)也會直接影響到色譜柱載樣量。例如離子態(tài)的堿性化合物就很容易過載，不僅無法達到<50μg的量級，有時候甚至1μg的量就能造成過載的現(xiàn)象。因此在常規(guī)疏水反相中，分子態(tài)的堿性化合物比離子態(tài)的堿性化合物有著更高的載樣量。目前的推測原因是離子態(tài)間互相排斥作用使得待分析組分在固定相表面更易達到飽和而造成過載。同時離子態(tài)的帶正電的堿性化合物也更容易和固定相中未鍵合的活性硅羥基發(fā)生次級相互作用。

針對質(zhì)量超載的問題，最簡單的方法則是減少進樣量。

2、體積過載

進樣體積太大通常會導致較寬的平頭峰，還會影響峰保留時間。體積過載對保留時間短的組分影響更大，而對于較后面流出的峰影響較小。那么如何選擇合適的進樣體積呢？

對于在最佳流速下 ，允許樣品進樣的Z大體積為：

其中：L為柱長（mm），dc為內(nèi)徑（mm），dp為粒徑（μm）

常用的各規(guī)格色譜柱最大進樣體積如下表：

注：最大進樣體積取的近似整數(shù)。上表中各個數(shù)據(jù)是嚴格按照公式計算出來的，但是這個數(shù)據(jù)并不絕對。